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網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)支持 ◇ 免疫親和柱在怎樣的條件下才能洗脫抗原?
免疫親和柱在怎樣的條件下才能洗脫抗原?
  • 更新日期:2022-07-05     信息來(lái)源:本站      瀏覽次數(shù):1992
    •    免疫親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),抗體連接在柱體內(nèi),樣品經(jīng)過(guò)提取、稀釋,在毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用洗脫液洗脫毒素,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

       
        免疫親和柱在標(biāo)準(zhǔn)的洗脫條件下很難洗脫的抗原一般是由多種化學(xué)鍵連接的。將幾種洗脫條件結(jié)合使用可以有效克服這些問(wèn)題。
        如果抗原不能用簡(jiǎn)單的條件洗脫,更換抗體可能比試用各種條件要容易些。

        一般使用過(guò)的層析柱比新柱洗脫更容易,所以新柱洗脫一般需要較苛刻的條件才能洗脫抗原。

        試用梯度洗脫方法,使抗原的洗脫峰清晰而陡峭。

        避免使用二硫蘇糖醇和其他還原劑,因其能破壞抗體重鏈和輕鏈間的鏈間二硫鍵。

        值得注意的是當(dāng)測(cè)試不同的洗脫條件時(shí),有些緩沖液雖然不能洗脫抗原,但在其他條件改變后仍可能是有效的洗脫緩沖液。

        實(shí)際上有些非洗脫緩沖液,可能改變抗原抗體反應(yīng)的平衡。例如高鹽條件具有疏水作用。應(yīng)用這些條件可以比較容易地收集抗體基質(zhì)上的抗原。

      免疫親和柱

         免疫親和柱的檢測(cè)方法:

        霉菌毒素測(cè)定的主要方法有薄層色譜,高效液相色譜,熒光光度和酶聯(lián)免疫吸附等方法。這些方法的實(shí)驗(yàn)原理和操作過(guò)程各不相同,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏性造成影響的因素也是多種多樣。這其中有一點(diǎn)是共同的也是重要的影響因素,那就是檢測(cè)樣品的純度。高純度的樣品雜質(zhì)含量很低,減少了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的干擾因素,從而提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。因此,選擇合適的提取純化方法對(duì)霉菌毒素檢測(cè)至關(guān)重要。
       
        傳統(tǒng)的霉菌毒素提純方法多采用有機(jī)溶劑萃取和化學(xué)吸附等方法,這些方法存在諸多不足之處:
        1、特異性不高,純化效率低,純化效果差。
       
        2、實(shí)驗(yàn)靈敏度和重復(fù)性差。
       
        3、操作過(guò)程煩瑣、復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng),勞動(dòng)強(qiáng)度大。
       
        4、使用有機(jī)溶劑容易造成環(huán)境污染,對(duì)操作人員傷害較大。

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